第611章 最大的难题（1 / 2）
请关闭浏览器的阅读/畅读/小说模式并且关闭广告屏蔽过滤功能，避免出现内容无法显示或者段落错乱。
不是猜测，是肯定，王铭洋把纸翻过来，在背面画了一个草图，是三个圆圈，接着王铭洋画线将它们连起来，继续说道：
这个伴生蛋白是三聚体结构，三个亚基通过二硫键连接，生命素的结构就藏在它们中间，就像核桃壳里的核桃仁，我们需要把它先识别出来。
就算知道结构，我们也没办法啊。这种蛋白在体外表达，大概率会折叠错误。大肠杆菌那种环境，连糖基化都做不了，更别说形成正确的二硫键了。
那就不用大肠杆菌，用酵母。
酵母？
对。酿酒酵母，或者毕赤酵母。它们是真核生物，有内质网，有高尔基体，能做翻译后修饰。虽然比哺乳动物细胞粗糙，但比大肠杆菌强得多。而且它们长得快，成本低。就像个听话的打工人，让它生产什么就生产什么。
严冰认真考虑后说：
毕赤酵母，我们确实有表达载体，但从来没做过这么复杂的蛋白。三个亚基，还要形成正确的二硫键，还要把生命素嵌进去……
不是嵌进去，王铭洋纠正他，是让酵母自己合成。如果生命素是这条蛋白链的一部分，或者是由这条蛋白链加工而来的，那只要让酵母表达正确的蛋白，它自然会带着生命素一起出来。
如果生命素不是蛋白的一部分呢？严冰反问，如果它只是被蛋白包裹的一种小分子，比如某种脂类或者短肽，那酵母就算表达了蛋白，也产不出生命素。
那就做两组实验吧，王铭洋思考后说道。
第一，用毕赤酵母表达伴生蛋白全长序列，看能不能拿到有活性的产物。第二把蛋白拆开，看看生命素到底藏在哪一段里。
拆开？
酶切，王铭洋肯定说道：
用胰蛋白酶、糜蛋白酶、V8蛋白酶，分别切割伴生蛋白，然后用质谱追踪每一段的分子量。哪一段里还有生命素的活性，哪段就是关键。
王铭洋的话，让严冰深吸一口气，甚至因为吸得太猛，导致她剧烈地咳嗽起来，王铭洋贴心的靠上去，用手心轻轻的给她顺着气。。。
接来下，王铭洋把堂哥叫了过来，三个人在实验室里，就如何合成生命素做了大量谈论，最后终于把方案定下来。
很多时候，生物实验跟精细化学实验有不少相同的地方，王铭泽的技术能力很高，他可以在制定合成路径时提供参考意见。
实验一开始，进行得并不顺利，磕磕碰碰的，但毕赤酵母表达系统确实运转起来了。
严冰在T-07和另外两台机器人的帮助下，把伴生蛋白的基因序列克隆进pPICZα载体，电转化进酵母细胞，用甲醇诱导表达。
三天后，Westernblot显示有目标条带，分子量大概一百二十千道尔顿，跟天然蛋白差不多。
出来了！表达量还不低，每升培养液大概有……五毫克！
王铭洋站在他身后，双手抱胸，表情平静，问道：纯化呢？
现在马上做。
镍柱亲和层析、离子交换、分子筛……一套流程走下来，严冰拿到了一管澄清的蛋白溶液。随后她迫不及待地开始做活性测试，把纯化蛋白加入培养的人类细胞中，等待二十四小时后检测端粒长度。
不可能，分子量对，Westernblot对，为什么没活性？
↑返回顶部↑